SV40T如何在永生化小鼠下丘脑神经元中锁定增殖开关并保留神经特性

病毒大T抗原的结构钥匙SV40大T抗原由708个氨基酸折叠成六个结构域，其中p53结合域（aa350–450）与Rb口袋蛋白结合域（aa100–250）是永生化核心。冷冻电镜显示，大T进入细胞核后形成六聚体环状结构，像套索一样将p53四聚体锁在胞质，阻断其核转位。Rb蛋白则被磷酸化变成“已激活”状态，E2F转录因子持续释放，细胞周期从G1/S关卡一路绿灯。端粒酶再激活的双保险原代下丘脑神经元在体外分裂15代后出现端粒缩短至4kb以下的危机。SV40T通过NF-κB通路诱导hT...

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选购指南：如何锁定适合实验的小鼠永生化下丘脑神经元细胞系-SV40+SV40T

1.明确实验需求：从科学问题倒推细胞特性下丘脑神经元研究通常围绕能量代谢、昼夜节律、神经内分泌三大方向。不同方向对细胞系的电生理活性、激素分泌谱、受体表达丰度有显著差异。以能量代谢研究为例，若需检测AgRP/NPY通路，应优先选择保留胰岛素与瘦素受体表达水平的品系；若聚焦昼夜节律，则关注是否具备可稳定记录的Per2-Luc报告信号。先把科学问题拆成可测量的细胞表型，再列出“必须具备”与“加分项”清单，筛掉不符合底线条件的供应商。2.溯源文件：SV40大T抗原整合位点与拷贝数S...

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一文读懂Caspase9检测试剂盒：原理、应用与操作解析

一、Caspase-9是什么?为什么需要检测它?​​​​Caspase-9(半胱天冬酶-9)​​是细胞凋亡(程序性细胞死亡)过程中的关键起始型Caspase(initiatorcaspase)，属于​​线粒体依赖的凋亡通路(内源性通路)​​的核心分子。其功能与作用如下：1.​​核心功能​​•当细胞受到内部损伤(如DNA损伤、氧化应激、线粒体膜电位崩溃等)时，线粒体外膜通透性改变，释放细胞色素C(CytochromeC)到细胞质中。•细胞色素C与凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf...

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不同来源的正常小鼠血清在实验中有何差异?

不同来源的正常小鼠血清在实验中存在显著差异，这些差异可能直接影响细胞培养、免疫实验、动物模型构建等结果的稳定性和可靠性。核心差异主要源于小鼠品系、生理状态、饲养环境及制备工艺四大维度，具体如下：一、核心差异来源及影响1.小鼠品系差异（最关键因素之一）不同近交系、远交系或基因修饰小鼠的遗传背景完全不同，导致血清中蛋白质组成、激素水平、免疫分子（如抗体、细胞因子）存在固有差异。近交系小鼠（如C57BL/6、BALB/c、C3H）：遗传背景均一，同一品系不同个体的血清成分稳定，实验...

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永生化小鼠心脏微血管内皮细胞-SV40+hTERT：工作原理深度拆解

双基因协同永生化设计SV40大T抗原封闭p53/Rb检查点，hTERT持续延伸端粒。二者通过P2A自剪切肽构建单开放读码框，摩尔表达比锁定1∶1。该比例下细胞在P30代端粒长度仍维持12–15kb，与原代差距启动子组合：CAG与Tet-On3G的双重保险CAG启动子驱动SV40-hTERT基础表达，Tet-On3G系统接入可诱导关闭。加入100ng/mL多西环素，48h内hTERTmRNA下降95%，细胞进入生长停滞。该开关用于研究血管生成基因时排除永生化背景干扰。微血管表型...

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