Caspase-3试剂盒的维修保养

底物溶液的储存与监测Caspase-3特异性底物Ac-DEVD-pNA（或AFC）在DMSO中配成10mM储存液，-80℃可保存1年。日常使用时分装为10μl/管，避免反复冻融。每次取用时观察溶液颜色：正常应为无色透明，若变为淡黄色提示降解。底物降解后AFC或pNA被提前释放，空白对照的荧光或吸光度升高。检测方法：取1μl底物储存液加入100μl缓冲液，读取OD405（对于pNA）或荧光（对于AFC），若数值超过试剂盒设定的空白上限2倍，需更换新批号。酶标板的重复使用限制Ca...

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Caspase-2试剂盒的选购指南

底物序列的特异性验证Caspase-2识别四肽序列VDVAD（Val-Asp-Val-Ala-Asp）。专属底物为Ac-VDVAD-pNA或Ac-VDVAD-AFC。选购时核对说明书中的底物序列。部分通用型试剂盒使用LEHD（Caspase-4/5）或DEVD（Caspase-3/7）底物，交叉反应率可达30%。要求供应商提供交叉反应谱数据：Caspase-2对VDVAD的切割效率设为100%，对DEVD应低于15%，对IETD（Caspase-8）低于5%。无交叉反应数据的...

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Caspase-1活性分析试剂盒的工作原理

底物切割的酶学机制Caspase-1属于半胱氨酸蛋白酶家族，特异性识别四肽序列YVAD（Tyr-Val-Ala-Asp）。试剂盒提供的底物为Ac-YVAD-pNA（乙酰化YVAD连接对硝基苯胺）。Caspase-1切割YVAD与pNA之间的肽键，释放游离pNA。pNA在405nm波长有强吸光度，显黄色。游离pNA的摩尔消光系数为10600M⁻¹cm⁻¹，可用于计算酶活性单位。活性依赖的亚基组装Caspase-1在细胞中以无活性的酶原形式（pro-caspase-1，分子量45...

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EdU细胞增殖成像分析试剂盒的操作使用

培养基中EdU的掺入条件EdU（5-乙炔基-2'-脱氧尿苷）替代BrdU掺入DNA合成期。贴壁细胞在正常培养基中加入EdU，终浓度10μM。处理时间根据细胞增殖速度设定：HeLa细胞2小时，原代成纤维细胞需12-18小时。超过24小时可能导致EdU掺入过多，背景增高。EdU工作液需新鲜配制，4℃存放超过一周会降解，表现为标记阳性率下降50%以上。固定与通透的步骤顺序先固定后通透。4%多聚甲醛室温固定15分钟，固定液需新鲜配制（储存超过一个月的多聚甲醛聚合，固定效果下降）。PB...

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细胞周期与细胞凋亡检测的技术参数解读

细胞周期DNA含量分析的参数设置流式细胞术检测细胞周期时，碘化丙啶（PI）染色后，G0/G1期细胞DNA含量为2C，G2/M期为4C，S期介于两者之间。仪器参数需设定：激发波长488nm，接收波长615±10nm（FL2通道）。线性放大模式（Lin）用于DNA含量分析，对数模式（Log）用于凋亡检测。CV值（变异系数）是核心质控参数，G0/G1峰CV应低于8%。CV超过10%时，S期和亚G1峰无法区分。细胞数量每样本至少收集10000个，分析亚G1凋亡峰时需增至...

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