永生化人胰腺基质细胞-(3223)-端粒酶逆转录酶+SV40 技术参数全表

细胞身份与编号体系

• 命名：HPSC-3223-hTERT/SV40

• 内部编号：3223 代表 2023 年 3 月建系的第 2 株，避免与早期批次混淆

• STR 指纹：D5S818=11,12；D13S317=9,11；D7S820=10,12；与 ATCC 数据库无交叉

基因插入方式与拷贝数

• hTERT：慢病毒载体 EF1α 启动子，MOI=3，单拷贝整合于 5q31.1 安全港位点

• SV40 大 T 抗原：逆转录病毒载体 MSCV-LTR 启动子，双拷贝整合于 19p13.3 和 20q13.2

• 插入位点通过 Splinkerette PCR 验证，无邻近抑癌基因破坏

倍增动力学窗口

• PDT（群体倍增时间）：22–26 h（DMEM/F12+10 % FBS，37 °C，5 % CO₂）

• 连续传代极限：实测 85 代无衰老迹象，代数标记以复苏当日为 P0

• 生长曲线拐点：>P90 出现倍增时间延长 15 %，建议启用早期备份

表面标志物基准值

• CD90-FITC：>95 % 阳性，MFI 5.3×10⁴

• CD73-PE：>98 % 阳性，MFI 4.1×10⁴

• CD45-APC：<0.5 % 阳性，确保无造血污染

• 流式检测每 5 代复检一次，漂移超过 5 % 即触发品质警报

功能性分泌谱

• IL-6：基线 120 pg/mL，LPS 刺激 24 h 后升至 4.5 ng/mL

• VEGF-A：基线 850 pg/mL，缺氧 24 h 后升至 12 ng/mL

• Collagen I：每 10⁶ 细胞 48 h 分泌 18 μg，ELISA 定量

• 功能漂移判定：任一指标下降 30 % 视为批次失效

核型与基因组稳定性

• 标准核型：46,XY，30 代内无克隆性异常

• CNV 负荷：<0.03 事件/Mb（low-pass WGS，0.5×）

• SNP 突变率：全外显子测序 0.2/Mb，低于背景 0.5/Mb 阈值

• 每 10 代提交第三方检测，报告公开下载

冻存与复苏规格

• 冻存液：90 % FBS + 10 % DMSO，细胞密度 5×10⁶ cells/mL

• 冻存管规格：1 mL/支，含 10 % 过量细胞量补偿复苏损失

• 复苏存活率：台盼蓝法 ≥90 %，24 h 贴壁率 ≥85 %

• 运输条件：干冰 ≥5 kg，48 h 内温控记录可追溯

支原体与无菌检测

• 支原体：荧光法 + PCR 双检，灵敏度 10 CFU/mL

• 细菌真菌：14 天培养阴性

• 内毒素：<0.25 EU/mL，适用于后续动物移植实验

配套培养基配方

• 基础培养基：DMEM/F12（1:1），含 GlutaMAX

• 添加组分：10 % 批次验证 FBS、1 % ITS-X、1 % NEAA、55 μM β-巯基乙醇

• 抗生素：Pen-Strep 100 U/mL，常规培养 2 代后撤除，避免干扰外泌体实验

文档与批次追溯

• 随货文件：STR 报告、核型图、支原体证书、功能检测报告

• 电子追踪：二维码扫描即得完整批次履历，支持一键导入 LIMS 系统