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2025-910
01检测下限:7pg/mL怎么压到2pg/mLMouseIL-4ELISAKit说明书给的是7.8pg/mLLLOQ,靠调整样本体积就能再下探。把上样量从100µL提升到150µL,信号抬升1.5倍,背景只涨0.3倍,信噪比从2.8提到4.2。延长TMB显色到25min,终止前OD450值0.08对应2pg/mL,仍在线性段。代价是血清用量翻倍,小鼠眼眶取血从150µL提到250µL,IACUC文件提前改一句即可。02动态范围:...
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2025-910
01把IL-2当成“细胞扩增油门”,先踩对点IL-2别名TCGF、Tcellgrowthfactor,浓度50pg/mL就能让CD25⁺T细胞进入S期。小鼠血清静息值3–8pg/mL,ConA刺激24h后冲到800–1200pg/mL,动态窗口200倍。实验目的不同,采样窗口全不同:做免疫激活曲线:刺激后6h、12h、24h、48h各取一次,画四象限折线。做药物抑制率:只抓24h单点,减少动物使用量50%。先把时间轴画在实验记录本首页,后面所有操作围绕这张表排程。02标准品梯...
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2025-910
01先搞清楚:你测的是哪种“IL-1β”IL-1β的别名多到让人眼花:IL1B、IL-1、IL1-BETA、IL1F2、catabolin、pro-interleukin-1-beta……在选购小鼠白介素-1βELISA试剂盒前,先确认样本类型与物种。血清、血浆、细胞上清、关节滑液、脑脊液,蛋白丰度差异可达两个数量级。大鼠、人、小鼠的序列同源性65%–80%,交叉反应不一定覆盖。把样本来源、预计浓度区间、检测目的(定量vs筛查)写在便签上,贴到显示器边框,后面每一步都要回头对...
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2025-99
1.抗原形态决定读数:血清里90%是三聚体,单体只占3%TNF-α在溶液里以三聚体稳定存在,单体半衰期2.夹心模式:捕获选鼠mAb,检测选兔pAb,避免竞争鼠源单抗2C8对三聚体亲合力3×10⁻¹⁰M,生物素化兔多抗检测灵敏度比鼠-鼠配对高1.8倍。鼠-鼠配对出现同型空间位阻,高浓度样本反而信号下降,出现“钩状”假阴性。说明书里标注“suggestedantibodypair”含2C8+rabbitpAb,才适合炎症风暴血清0.5–10ng/mL的宽范围。3.酶标放大:链霉亲...
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2025-99
1.检测下限≠功能灵敏度,数据1.2pg/mL实测只能到9pg/mL说明书标注LOD用空白均值+3SD算,血清基质里非特异性结合高3倍。功能灵敏度(20%CV对应的低值)才是真实门槛。把8块板6批次0点加标曲线拉出来,功能灵敏度落在8–10pg/mL。低于这个值的数据即使读得出数,CV也飙到25%,投稿被质疑技术重复性。写文章直接把LLOQ写成9pg/mL,审稿人不会再卡。2.动态范围1.5–120ng/mL是理论值,血清稀释线性决定可用上限TIMP-1在肝硬化血清平均180...
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