一文了解PI双染细胞凋亡检测

PI双染细胞凋亡检测是流式细胞术中经典的细胞周期与凋亡分析方法，通过特定荧光染料对细胞DNA含量的差异结合特性，区分正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。该方法操作简便、结果直观，在肿瘤研究、药物筛选及免疫学等领域广泛应用。一、PI双染细胞凋亡检测原理PI是一种核酸嵌入型荧光染料，其检测核心基于​​细胞膜通透性改变​​与​​DNA含量差异​​两大特性：1.​​活细胞/早期凋亡细胞​​：细胞膜结构完整，PI无法穿透，无荧光信号。2.​​晚期凋亡细胞/坏死细胞​​：细胞膜破损后，PI进入...

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IL-13 工作原理：从受体激活到纤维化的细胞轨迹

信号轴速写：IL-13Rα1与α2的阴阳两面IL-13先被IL-13Rα1捕获，再拉IL-4Rα组成异二聚体，JAK1/TYK2交叉磷酸化，STAT6同源二聚体进核。IL-13Rα2没有胞内结构域，却能在膜上“蹲点”把IL-13吸走，浓度高时形成负反馈。体外刺激10ng/mL是临界点：低于10ng/mLSTAT6磷酸化峰值30min，高于10ng/mLα2受体饱和，STAT6信号延长到120min，细胞开始往纤维化方向走。STAT6磷酸化动力学：Western与流式时间窗不同...

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IL-12/IL-23p40 工业检测标准：从细胞上清到上市放行的七寸

参比：WHONIBSC21/142每支10000IU的隐藏含义IL-12/IL-23p40没有独立国际标准，WHO把p40亚基合并进IL-12总量单位。21/142标称10000IU/支，换算后p40质量浓度25ng/mL。标曲第一点必须覆盖这个数值，ELISA曲线才会与全球多中心数据互认。省掉这支参比，申报资料直接收到“缺少溯源链”发补。灵敏度门槛：FDA指南0.5pg/mL是真实底线细胞治疗产品残留宿主细胞因子，FDACMC指南要求定量下限≤0.5pg/mL。传统夹心法一...

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IgM 操作使用：让五聚体乖乖听话的实验室现场笔记

融化即开工：37℃水浴是第一道裂缝IgM在4℃储存液里以五聚体+六聚体混合形式存在，温度一拉到37℃，J链氢键网络开始松动。水浴超过90秒，六聚体比例从8%升到25%，ELISA背景直接翻三倍。标准动作是37℃恒温金属浴60秒，轻弹管壁三次立即置冰。金属浴比水浴导热快，减少溶解时间20秒，背景可压回基线。稀释液配方：PBS+1mMCaCl₂锁死补体结合位IgM的Cμ1区需要Ca²⁺维持刚性，缺Ca²⁺时五聚体变松散，流式染色出现双峰。普通PBS不含钙，补加1mMCaCl₂后，...

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IgG2a 技术参数：把“纸面数据”翻译成实验成功率

亚型折叠常数：为什么37°C下IgG2a比IgG1早4h聚合厂商SDS-PAGE图里150kDa条带干净利落，不代表你的细胞上清也能干净。IgG2a的CH2域去糖基化位点少，疏水补丁暴露早，37°C振荡培养18h就开始二聚。把摇床降到32°C，补加0.5M甜菜碱，聚合率从18%降到3%，表达量反而提升12%。纸面参数不写温度曲线，自己补实验才能拿到真·产量。亲和力数字陷阱：KD=0.2nM仍旧染不出阳性群流式抗体目录里IgG2a的KD常被标成0.2nM，看起来比IgG1高一个...

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