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2025-1027
收货当天必须做的体检原瓶抵达后立刻放4℃缓霜,避免甘油局部结晶。离心1min2000×g,把管壁液滴收到底部,测OD280乘1.4估算浓度,误差10%直接退货。HRP版本顺手测RZ=A403/A280,分装体积算到微升每管一次实验用量+10%富余,50μL是WB常用临界点,低于30μL蒸发量占比陡升。用0.5mL低蛋白吸附管,管底锥形设计减少死角。荧光标记版避光铝箔纸包两层,贴标签写日期和批号,避免-80℃结霜后字迹消失。冻融循环硬上限A21050原液含50%甘油,-20℃仍...
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2025-1027
免疫原设计决定特异性A21040采用完整大鼠IgG分子(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c混合)对山羊进行多点超免疫。血清先经ProteinG粗提,再流过大鼠IgG预吸附柱,把可能交叉的小鼠、兔、人IgG全部拉掉。最终得到的抗体用ELISA检测,对大鼠IgG各亚型识别斜率一致,与小鼠IgG交叉OD450<0.02,保证WB、IF、FC场景里不会误抓非目标条带或细胞群。表位识别区域解析胃蛋白酶水解+肽谱mapping显示,A21040主要识别大鼠IgGFc段CH2–C...
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2025-1027
免疫原与纯度底牌A21030用完整山羊IgG分子对新西兰大白兔进行超免疫,血清先过ProteinA亲和柱,再跑山羊IgG预吸附柱。出厂COA里写纯度≥97%,SDS-PAGE检测重链50kDa、轻链25kDa条带无杂带,实际银染能看到0.3%山羊白蛋白残留,对大多数应用不构成干扰,做山羊源Co-IP时需要在封闭液里额外加1%山羊血清做竞争阻断。效价单位与实测差距ELISA效价≥1:200000是厂家标板数据,板底包被100ng山羊IgG。自建实验把包被量降到10ng,效价仍维...
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2025-1027
开盖前先做三件事A21020到手先别急着稀释。离心30s把管壁液滴收到底部,涡旋3s让甘油分散均匀,再快速离心一次。这一步能把浓度误差拉到5%以内,后续条带灰度重现性直接提升一个量级。稀释液配方实测对比PBS-T加5%脱脂奶是常用体系,背景控制到0.05AU以下。做磷酸化蛋白把奶换成3%BSA,奶里自带碱性磷酸酶会把p-ERK条带吃掉。荧光二抗体系直接上TBS-T,PBS里钠离子会让Alexa647量子产率掉12%。HRP系统想再省抗体,把Tween-20降到0.02%,A2...
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2025-1027
为什么二抗决定Western成败WB条带发虚、背景发灰、荧光淬灭快,90%的troubleshoot最终追到二抗。山羊抗小鼠IgG是实验室用量最大的二抗,批次差一个字母,效价能掉三倍。A21010这款货号在采购目录里出现频率高,先把关键指标拆开看,再决定要不要下单。先看宿主与交叉A21010宿主是山羊,免疫原为小鼠IgG全分子,通过免疫亲和层析去掉山羊内源IgG,交叉反应谱系写得很干净:小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3全部识别,不与兔、大鼠、人、牛血清反应。多色...
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