免疫沉淀（IP）中重链/轻链干扰的成因

在常规的IP-WB流程里，IP抗体（一抗）的种属与WB二抗的识别范围重叠，重链（~50kDa）和轻链（~25kDa）会被HRP-二抗直接识别，形成两条“幽灵带”。目标蛋白如果正好落在25–55kDa区间，信号会被掩盖。Fc片段是重链恒定区，小鼠IgG-Fc片段常被当作封闭剂或阳性对照，却进一步放大了这种串扰。专用二抗的设计逻辑：把“识别”做成“不识别”IP专用二抗的核心思路是“删除”Fc结合能力。厂家用胃蛋白酶切除完整IgG的Fc段，保留F(ab’)₂，再定向偶联HRP。A2...

查看更多

看懂 A24311 技术底牌：IFKine™ Orange 驴抗小鼠 IgG 硬核参数

561nm激光器越来越普及，真正能跟PE错开、又兼容561的橙色二抗却不多。IFKine™Orange驴抗小鼠IgG（A24311）标称激发555nm、发射570nm，听起来像PE的翻版，拆开COA才发现荧光团结构、F/P比、交叉吸附深度全是定制项。下面把技术参数拆成6组，直接告诉你在仪器端怎么落地。1.光谱坐标：555/570nm落在561-586/15滤片正中心A24311实测激发峰555nm，半峰宽18nm；发射峰570nm，半峰宽22nm。561nm激光器...

查看更多

实验室没标、仪器老旧、背景飙高？——A24231 整套解决方案

IFKine™Green驴抗山羊IgG（A24231）常被当成“备胎”二抗，真正上场时却发现山羊宿主抗体稀缺、旧流式仪只有488nm、组织切片自发荧光强。把问题拆三段，给对应解法，每一步都配实测数据，直接复制即可落地。1.山羊一抗库存见底：用稀释-回收循环把100μL撑到20次山羊抗兔、抗鼠市面常见，抗山羊却冷门。0.5mg山羊一抗要价3k，预算卡死。将一抗1:100稀释后4℃孵育过夜，回收液加0.02%NaN₃可存4周。A24231作为二抗1:200稀释，信号依...

查看更多

把 A24221 作用发挥到底：IFKine™ Green 驴抗兔 IgG 操作清单

488nm通道被FITC占着，575nm让给mCherry，只剩525/50空位。IFKine™Green驴抗兔IgG（A24221）标的是这个缺口，真上机却发现补偿怎么调都窜色。问题往往不在抗体本身，而在操作顺序。下文按实验流程拆7步，每步给出通过验证的参数，照单执行即可一次成型。1.离心去颗粒：300g5min省30%补偿时间血清里残留脂滴会让激光散射变宽，补偿值虚高。全血或培养液先300g5min，取上清再1:100稀释抗体，525/50通道的阳性群宽度从1...

查看更多

A24211 技术参数拆解：IFKine™ Green 驴抗小鼠 IgG 的 5 组硬指标

流式panel设计到第3色时，信号串扰最先在488nm通道炸开。IFKine™Green驴抗小鼠IgG（货号A24211）被当作“补偿友好”的替补，真正上机才发现批次间荧光强度能差40%。把COA里的参数读透，才能提前算出补偿矩阵，避免二次上样。1.荧光基团：AlexaFluor488等效光谱，却更耐pHA24211搭载IFKine™Green，激发峰495nm，发射519nm，与AlexaFluor488全重叠。差异在偶联臂：长链PEG把荧光团撑离抗...

查看更多