把重链信号压到检测线以下：A25222 的指标拆解

IP-WB的噩梦在55kDa和25kDa两条带。A25222在出厂质检单里给出“兔IgG-Fc交叉反应≤0.01%”的数值，换算成绝对量：上样1μgIP洗脱液，重链残留不到0.1pg，低于ECL的化学发光阈值。真正让这条二抗进入“专用”阵营的是把Fc段结合能力降到仪器读数为零。技术参数背后的工艺抗体骨架：胃蛋白酶切后分子量110kDa，比完整IgG小30%，扩散系数高，WB孵育45min就能饱和。HRP密度：摩尔偶联比1:4，酶活性450U/mg，1:10000稀释仍能给出1...

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兔IgG重链为什么总在WB里“阴魂不散”

免疫沉淀用的是兔源一抗，WB二抗还是抗兔，55kDa位置那条重链带几乎成了标配。兔IgG重链Fc段与ProteinA/G的亲和力比鼠源高一个量级，洗脱环节稍一温和，重链就会跟着目标蛋白一起被“拖”下来。WB阶段，HRP标记的二抗会再次识别这条重链，目标条带被淹没。A25122的底层设计：把重链信号“归零”A25122是抗兔IgGF(ab’)₂片段，生产时用固定化胃蛋白酶切除Fc，再把HRP定向偶联在铰链区二硫键附近。质检报告里有一项“兔重链交叉指数”，数值0.02%，行业平均...

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免疫沉淀（IP）中重链/轻链干扰的成因

在常规的IP-WB流程里，IP抗体（一抗）的种属与WB二抗的识别范围重叠，重链（~50kDa）和轻链（~25kDa）会被HRP-二抗直接识别，形成两条“幽灵带”。目标蛋白如果正好落在25–55kDa区间，信号会被掩盖。Fc片段是重链恒定区，小鼠IgG-Fc片段常被当作封闭剂或阳性对照，却进一步放大了这种串扰。专用二抗的设计逻辑：把“识别”做成“不识别”IP专用二抗的核心思路是“删除”Fc结合能力。厂家用胃蛋白酶切除完整IgG的Fc段，保留F(ab’)₂，再定向偶联HRP。A2...

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看懂 A24311 技术底牌：IFKine™ Orange 驴抗小鼠 IgG 硬核参数

561nm激光器越来越普及，真正能跟PE错开、又兼容561的橙色二抗却不多。IFKine™Orange驴抗小鼠IgG（A24311）标称激发555nm、发射570nm，听起来像PE的翻版，拆开COA才发现荧光团结构、F/P比、交叉吸附深度全是定制项。下面把技术参数拆成6组，直接告诉你在仪器端怎么落地。1.光谱坐标：555/570nm落在561-586/15滤片正中心A24311实测激发峰555nm，半峰宽18nm；发射峰570nm，半峰宽22nm。561nm激光器...

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实验室没标、仪器老旧、背景飙高？——A24231 整套解决方案

IFKine™Green驴抗山羊IgG（A24231）常被当成“备胎”二抗，真正上场时却发现山羊宿主抗体稀缺、旧流式仪只有488nm、组织切片自发荧光强。把问题拆三段，给对应解法，每一步都配实测数据，直接复制即可落地。1.山羊一抗库存见底：用稀释-回收循环把100μL撑到20次山羊抗兔、抗鼠市面常见，抗山羊却冷门。0.5mg山羊一抗要价3k，预算卡死。将一抗1:100稀释后4℃孵育过夜，回收液加0.02%NaN₃可存4周。A24231作为二抗1:200稀释，信号依...

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