永生化肠平滑肌细胞-SV40+hTERT 工作原理拆解

SV40大T抗原与hTERT双元件协同，把原代肠平滑肌的复制寿命从10代推到50代以上，同时保留了收缩和信号响应。下文按时间轴梳理从基因递送、端粒延伸、细胞周期劫持到表型锁定的全过程，每个环节都给出可验证的分子事件和实验读数。基因递送：慢病毒双顺反子架构载体骨架pLVX-EF1α-SV40T2A-hTERT-Puro把两段永生化元件放在同一开放读码框，中间插2A自剪切肽，保证1:1化学计量。滴度1×10^8TU/mL，MOI3时感染效率94%。嘌呤霉素筛选48h可见100%细...

查看更多

永生化人肠平滑肌细胞-HPV16-E6/E7 的技术参数全景档案

实验设计、审稿人质疑、审计核查，所有环节都绕不开一句“请提供技术参数”。下面把这支细胞株的核心指标拆到最小颗粒度，逐项给出可溯源的数值、测定方法和出处，让任何实验室都能直接引用或复现。基因组编辑痕迹HPV16-E6/E7插入位点慢病毒载体采用pLVX-EF1α-E6-IRES-E7-Puro，整合位点通过LAM-PCR捕获，测序定位chr3:128,456,789与chr12:58,321,007。两份全基因组测序文件已上传至CNGBdb（项目号CNP0004381），下载后...

查看更多

永生化人肠平滑肌细胞-SV40T 实验室操作使用全流程

拿到一支冻存管，离真正跑稳实验还有一串细节。下面把从复苏、铺板、传代到功能验证的每一步拆成可复制的SOP，直接给出关键参数和踩坑提示，照着做即可把细胞维持在最佳性能区间。冻存管复苏：37°C水浴90秒的底层逻辑SV40T永生化细胞对DMSO毒性极敏感。水浴时间2min，DMSO渗透压骤变会导致膜破裂；操作要点：预热15mL37°C含10%FBS的DMEM培养基。冻存管晃动频率120rpm，水面低于管帽防止污染。1:10稀释离心200g×5min，立即去除上清，防止DMSO残留...

查看更多

永生化人小肠平滑肌细胞-SV40 选购指南

实验室里每一次细胞复苏，都是一次成本与时间的博弈。选错细胞株，意味着三个月的实验周期、数万元试剂全部作废。下面这份指南，把采购决策拆成七个可落地的比对维度，直接给出可验证的实操方法，避免踩坑。01细胞来源与伦理合规原始组织溯源要求供应商出具《组织来源声明》原件，确认样本来自合法器官捐献或手术残余组织，并附带IRB（机构审查委员会）批准号。可在美国NIHRePORTER数据库中输入批准号核验真伪。缺失这一文件，文章投稿阶段极易被审稿人质疑伦理合法性。SV40大T抗原转染方式早期...

查看更多

永生化大鼠脑微血管内皮细胞-SV40+hTERT：常见故障与维修保养全流程

污染早期信号与应急处理镜下发现细胞间隙闪光颗粒，48h内增殖停滞，多半为支原体。立即执行“三步净化”：丢弃所有未处理培养瓶，防止气溶胶扩散。用BMEC-Detox培养基（含50µg/mL普拉特霉素）连续传3代，每代做qPCRCt≥35验证。同时冻存净化株，建立MasterRescueStock，避免重复净化成本。倍增放缓的根因排查传代周期由24h延至36h，先测葡萄糖摄取率。若降至50%以下，检查培养箱CO₂浓度漂移；若正常，则跑β-半乳糖苷酶染色，阳性率15%提...

查看更多