技术文章
更新时间:2025-11-04
点击次数:15
        Kd≈10⁻¹⁵ M,接近共价键。BMR2030把重组链霉亲和素以酰胺键固定在6%交联琼脂糖,表面密度≥6 mg蛋白/mL凝胶,实测动态载量≥9 mg biotinylated IgG/mL,允许在150 cm/h流速下保持<0.3 MPa背压。
45–165 μm粒径分布,HETP值0.08 cm,适合0.5×5 cm到1×30 cm柱床;柱高10 cm时理论塔板数>3000,满足高纯度捕获,也能直接装进96孔过滤板做高通量筛选。
pH 2–13内4 h载量损失<5%;6 M盐酸胍、8 M尿素、20 mM β-ME、70%乙醇均可短期接触。0.1% SDS会使链霉亲和素亚基解聚,载量骤降60%,清洗时禁用。
4 ℃结合速率常数kₐ降低25%,延长孵育到30 min可弥补;25 ℃载量峰值出现更早,适合快速批次纯化。树脂在60 ℃处理1 h活性剩85%,可承受热灭菌,但建议≤40 ℃长期使用。
标准流程:0.1 M NaOH 15 min → 中性PBS → 20%乙醇保存。循环100次载量剩80%,200次剩65%;若改用0.1 M柠檬酸钠pH 2.2洗脱,寿命缩短至50次,但能在温和条件下回收活性蛋白。
每批BMR2030出厂附三份数据:
链霉亲和素载量(HABA法)
游离生物素结合率(≥95%)
颗粒完整率(激光粒度,>95%)
任一项超±5%即判定不合格,可无条件退换。
融合标签:Biotin-Tag、Avi-Tag、酶标生物素均适用
缓冲液:Tris、PBS、HEPES,盐浓度0–2 M,还原剂≤20 mM DTT
金属螯合剂:≤10 mM EDTA无影响,>50 mM会削弱电荷屏蔽,导致非特异上升