KTP2020 MBP-Tag蛋白纯化试剂盒：实验室即开即用全流程手册

1. 盒内清单：一次性看完部配件

KTP2020试剂盒分10次与50次装，统一提供：

• 2 mL或10 mL dextrin resin（MBP resin，45–165 μm）

• 空重力柱（带1 mL或5 mL筛板）

• 浓缩洗脱缓冲液（10×，含麦芽糖）

• 快速连接接头与塞盖

树脂已预平衡，拆封后无需再CIP，5 min即可上样。

2. 裂解与预处理：让MBP标签充分暴露

MBP折叠紧密，高压匀浆压力≥800 bar做两遍，保证>90%标签位于表面；0.2 μm过滤后黏度≤4 cP，防止堵塞dextrin resin。盐浓度控制在0.15–0.5 M NaCl，避免离子交换效应拖尾。

3. 上样流速：手拧重力柱的毫米级控制

柱床高5 cm时，重力自然流速1 mL/min≈30 cm/h，最匹配MBP-dextrin结合动力学；推注过快用拇指轻按柱口降低流速，肉眼观察液面下降2 mm/s即为安全区，超压风险接近零。

4. 洗脱策略：麦芽糖梯度 VS 一步高浓度

• 温和洗脱：10 mM麦芽糖可解离80%靶蛋白，适合后续做晶体学

• 一步20 mM麦芽糖，2 CV回收率>95%，省时间

蛋白对麦芽糖敏感时，改用pH 7.0→5.0梯度，4 CV完成，载量损失<5%

5. 树脂再生：三步法延长循环寿命

1. 3 CV 0.1 M NaOH去除内毒素与顽固蛋白

2. 5 CV纯水冲洗至pH中性

3. 3 CV 20%乙醇保存

按此流程KTP2020树脂循环50次载量仍保持85%，碱洗次数>50后颗粒完整率>92%

6. 通量升级：把重力柱搬到96孔真空板

将dextrin resin分装至96-well过滤板（每孔100 μL），真空度-0.2 bar，同步处理96个MBP克隆，总时长40 min；树脂可回收再用两次，单样本成本降至0.8元，适合表达筛选。

7. 常见故障与现场修正

• 洗脱峰拖尾：补加5 mM麦芽糖再洗1 CV，回收率可拉回8%

• 树脂变白：误用NaOCl消毒，糊精被氧化，配基失效，需整批更换

• 背压骤升：样本含DNA，加终浓度5 U/mL Benzonase裂解即可