小鼠 IgG2A 工作原理：从铰链结构到体内半衰期

命名渊源：IgG2A 到底代表哪条基因

• 小鼠 Ig heavy constant gamma 2a 由 Ighg2a 基因座编码，位于 12 号染色体，与 IgG1、IgG2B 并排

• 重链恒定区 330 aa，铰链仅 11 aa，形成刚性杆，决定 Fc 取向

• 文献常写 IgG2a、IgG2A，大小写混用，订购抗体时统一搜“Mouse IgG2A"避免漏单

铰链短杆：二硫桥拓扑决定蛋白酶切口

• Cys233-Cys238 形成额外桥，抗 IdeS 切割能力比 IgG1 高 4 倍

• 木瓜蛋白酶作用位点被遮蔽，Fab 得率仅 60 %，需延长酶切时间至 16 h

• 做双抗夹心 ELISA 时，捕获抗体若选 IgG2A，检测二抗必须抗小鼠 IgG2A 特异性，防止 IgG1 交叉

FcγR 亲和谱：体内功能放大器

• 小鼠 FcγRIII 结合 KD 0.8 μM，比 IgG1 高 2 倍，ADCC 窗口更宽

• FcγRIIB 抑制型受体 KD 2.3 μM，比例决定炎症还是耐受

• 人源化改造把 2A 铰链嫁接到人 IgG1，ADCC 提升 50 %，半衰期不变

糖型空白：NS0 与 CHO 的反差

• NS0 表达缺少 β-1,4-半乳糖转移酶，G0 占比 80 %，CDC 活性低

• CHO 表达 G2 提升到 35 %，与 FcγRIIIa 结合力翻倍

• 做肿瘤治疗模型，优先选 CHO 来源 IgG2A 对照，避免糖型偏差掩盖药效

体内半衰期：FcRn 回收曲线

• 小鼠静脉注射 10 mg/kg，血浓遵循二相衰减，t1/2β 6.8 天，比 IgG1 长 0.9 天

• FcRn 结合位点 IHHN 突变去除后，半衰期跌至 1.2 天，验证 FcRn 依赖性

• 人 FcRn 转基因小鼠中，人 IgG1 与鼠 IgG2A 半衰期接近，可互换做 PK 对照

免疫激活阈值：补体与细胞因子

• C1q 结合 KD 1.1 μM，需 30 μg/mL 以上才看到 CDC

• LPS 放大模型里，IgG2A 免疫复合物诱导 IL-6 峰值 1800 pg/mL，IgG1 仅 600 pg/mL

• 做细胞因子风暴研究，选择 IgG2A 亚类更容易触发表型

亚类干扰：双抗夹心如何避免误判

• 小鼠血清本身 IgG2A 背景 20-30 μg/mL，做 ELISA 时线性范围上限 500 pg/mL

• 捕获抗体若为人源 IgG 抗小鼠 IgG2A，检测抗体需选抗人 κ 轻链，阻断内源干扰

• 血清稀释梯度从 1:100 起跳，减少基质效应，回收率保持在 90-110 %

荧光染色：Fc 阻断一步不可省

• 流式检测小鼠脾脏 CD86，常用抗小鼠 IgG2A 二抗

• FcγRIIB/III 表达细胞会把 IgG2A 吸附，造成 15 % 假阳性

• 预孵育 2.4G2 抗体 10 μg/mL，5 min 完成 Fc 阻断，背景降至 1 % 以下