一文读懂乳酸脱氢酶检测试剂盒

一、乳酸脱氢酶检测试剂盒概念

乳酸脱氢酶检测试剂盒是一种用于定量检测生物样本(如血清、血浆、细胞裂解液等)中乳酸脱氢酶活性的生物化学试剂套装。

核心用途：

LDH活性是临床医学和生命科学研究中一个非常重要的标志物。检测它的主要意义在于：

在临床上：作为细胞损伤或死亡的“警报器”。当细胞受损(如心肌梗死、肝炎、溶血、恶性肿瘤)时，LDH会从细胞中释放到血液中，导致血清LDH活性升高。

在科研中：常用于评估细胞毒性(如药物、毒素的作用)、细胞增殖情况，以及研究细胞代谢状态。

二、检测原理：它是如何工作的?

目前绝大多数试剂盒都采用国际临床化学联合会推荐的连续监测法，其原理基于LDH催化的可逆化学反应。我们通常检测的是正向反应，即乳酸转化为丙酮酸。

反应步骤如下：

主反应(LDH催化)

乳酸 + NAD⁺ → 丙酮酸 + NADH + H⁺

LDH酶催化乳酸脱氢，生成丙酮酸，同时使氧化型辅酶I转变为还原型辅酶I。

指示反应(与主反应偶联)

生成的丙酮酸会立即与反应体系中的另一种物质——2,4-二x基苯肼发生反应，生成丙酮酸二x基苯腙。

注意：在一些更现代、更直接的试剂盒中，这一步可能被另一种偶联反应替代，但基本原理相通。

比色测定

丙酮酸二x基苯腙在碱性条件下呈棕红色，且颜色的深浅与生成的丙酮酸量成正比，进而与LDH的活性成正比。

通过在450nm波长下测定吸光度的变化速率，就可以计算出LDH的活性单位(通常为 U/L 或 U/mg prot)。

简单理解：样本中的LDH越多(活性越高)，反应生成的有色物质就越多，溶液颜色就越深，仪器测出的吸光度值变化就越快。

三、试剂盒典型组成

一个标准的LDH检测试剂盒通常包含以下核心组分：

组分名称作用

缓冲液：提供最适且稳定的pH环境(通常为弱碱性)。

底物液：含有LDH反应的底物——乳酸(或其盐，如乳酸锂)。

辅酶I：即 NAD⁺，是LDH反应必需的辅酶。

显色剂/终止液：通常是2,4-二x基苯肼，用于与丙酮酸反应生成有色物质。

标准品：已知浓度的丙酮酸标准溶液，用于制作标准曲线，保证结果准确。

说明书：详细的操作步骤、注意事项和计算方法。

四、结果解读：数据意味着什么?

1. 临床意义(血清样本)

LDH广泛存在于人体各组织中，因此其升高不具有器官特异性，必须结合其他检查来判断具体病灶。

LDH升高常见于可能原因

心脏疾病急性心肌梗死(发病后12-24小时开始升高，2-3天达峰，持续7-10天)，心肌炎。

肝脏疾病急性肝炎、肝硬化、肝癌、阻塞性黄疸。

血液疾病溶血性贫血、白血病、淋巴瘤。

肌肉疾病肌营养不良、挤压综合征。

恶性肿瘤多种实体瘤(因其快速生长导致细胞坏死)。

其他肺部梗死、肾病、休克。

2. 科研意义(细胞样本)

细胞毒性检测：在细胞培养板中，药物或毒素处理会导致细胞膜损伤，LDH释放到上清液中。上清液中的LDH活性越高，代表细胞毒性越强/死亡细胞越多。

计算公式：细胞毒性 (%) = (实验组LDH - 空白组LDH) / (最大酶活组LDH - 空白组LDH) × 100%

细胞增殖/存活检测：有些方法会检测细胞裂解后的LDH活性，因其与活细胞数量成正比。

五、注意事项

样本类型：血清、血浆(肝素抗凝)、细胞上清液、组织分浆等。避免溶血，因为红细胞内LDH含量高，轻微溶血都会导致结果假性升高。

线性范围：确保样本的吸光度值在标准曲线的线性范围内，否则需稀释后重测。

操作稳定性：LDH对温度敏感，反应需在恒温下进行。操作应迅速，避免反复冻融样本。

不同同工酶：LDH有5种同工酶，分布在不同的器官。若需精确定位，可进行LDH同工酶电泳分析。

乳酸脱氢酶检测试剂盒是一个成熟、高效的工具。通过一个标准的颜色反应，它将不可见的酶活性转化为可测量的光信号，从而为医生和科研人员提供了评估细胞损伤程度和代谢状态的关键窗口。理解其原理和步骤，是正确使用和合理解读其结果的基础。