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MICA:让“找不到抗体”成为过去式的选购清单

更新时间:2025-10-10点击次数:74

先认等位基因,再谈实验

MICA 全长 6.2 kb,5 个常见等位基因占据人群 90% 频率。MICA*008 缺失 6 个 GCT 重复,分子量比 *004 小 2 kDa,SDS-PAGE 位置直接偏移。采购前把细胞 STR 报告翻出来,等位基因写进采购系统备注,抗体公司会按对应序列做亲和测试,避免到货再换货浪费两周。


蛋白版本:胞外区起点决定糖型

  • 75-308aa:昆虫细胞表达,Man₉GlcNAc₂ 高甘露糖型,适合结晶,SPR 信号干净。

  • 25-308aa:含部分柄区,HEK293 表达,复杂糖型,与 NKG2D 结合亲和力提高 1.4 倍,做流式更亮。

  • 全长 1-383aa:带跨膜区,需加 0.1 % DDM 维持可溶,适合脂质体锚定实验,产量掉 60 %,价格直接翻倍。


抗体横评:克隆号背后是表位战争

克隆表位多态影响
6D4α1  62-70识别 *004/*009,与 *008 结合掉 70 % 信号
3H5α2  148-156不受 *008 缺失影响,可做泛检测
AMO1糖基化依赖只能用于原生细胞,去糖基化 Western 直接白板

做肿瘤微环境双染,选 3H5-AF647 + CD8-AF488,补偿矩阵一次到位,不用反复调电压。


标签选择:His 位置影响 BLI 基线

C-His 与 N-His 在 SPR 芯片上取向不同,N-His 胺基密度高,芯片表面负电荷屏蔽明显,基线漂移 <1 RU/min。C-His 容易形成二聚体,动力学拟合需加二聚体模型,分析时间翻倍。下单前确认实验平台支持哪种取向,避免数据返工。


标准品形态:液体 vs 冻干,运输温度是隐藏成本

液体 MICA-Fc 融合蛋白 -80 °C 托运,干冰费 600 元/次,适合月用量 >500 管的高通量平台。冻干粉 4 °C 运输,重悬后 4 h 内活性掉 8 %,小实验室月用量 <100 管,选冻干平均单管省 4 元,一年省出抗体预算。


批次质控:把“糖谱一致性"写进合同

行业默认 SDS-PAGE 纯度 ≥95 %,但糖谱差异能让同一克隆抗体信号差 30 %。合同里加一条:到货 7 日内做 LC-MS 糖型谱,Man₅-GLcNAc₂ 比例与参考批次差异 >5 % 直接退换,运费厂家承担。过去两年统计,能拦下 10 % 的隐性次品。


价格陷阱:按“测试数"计价最透明

市面三种计价方式换算成 1000 测试:

  • µg 模式:200 µg,单价 1500 元/100 µg,总价 3000 元

  • 测试数:1000 测试 2000 元,送 100 测试质控

  • 整瓶模式:1 mg 2800 元,拆开 30 天用完,报废 15 %

月样本量 >800 选测试数,<300 选 µg 模式,中间值选整瓶会剩半瓶,浪费比高达 20 %。


现场验收:15 分钟三步法

  1. 扫码批号,比对糖谱,无新增杂峰

  2. 取 5 µL 蛋白 + 50 ng 3H5 抗体,流式 30 s,荧光强度落在参考值 ±10 %

  3. Gitter 云记录自动上传,厂家后台 24 h 内电子签章,质保期从签章日起算


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(全国服务热线)

武汉市生物加速器c17-2

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