永生化子宫内膜基质细胞 SV40T/hTERT 选购指南

读懂命名：如何一眼识别“真永生化"

永生化细胞株的命名往往隐藏着技术路线。SV40T 指猿猴病毒 40 大 T 抗原，负责解除 p53/Rb 通路；hTERT 则是人端粒酶逆转录酶，负责维持端粒长度。两者联合表达通常意味着细胞突破了双重衰老屏障，具备持续增殖能力。选购时先核对基因组合是否完整，仅有 SV40T 而缺失 hTERT 的“半永生化"细胞会在 30 代左右出现生长停滞，实验中途更换批号会导致数据断层。

溯源文件：不只是 COA 那么简单

索要细胞株的“出生证明"应包括：原代来源（手术标本或刮宫组织）、伦理批件编号、病毒转导批次、单克隆化记录、STR 图谱、支原体检测报告。重点查看单克隆化记录，非单克隆株存在遗传异质性，后续转录组或甲基化实验会出现批次波动。STR 图谱需与 ATCC 或 DSMZ 数据库比对，确认无交叉污染。支原体检测应使用荧光法或 PCR 法，培养法易漏检。

代数与功能：代数越高≠越差

行业普遍接受 10–30 代为最佳实验窗口。超过 30 代需追加核型分析：46,XX 且端粒长度 ≥8 kb 可继续用；若出现 8 号染色体三体或端粒缩短至 5 kb，建议降级做增殖实验而非分化实验。功能验证清单包括：雌激素受体 ERα/β 表达量（WB 检测不应低于原代 70%）、蜕膜化诱导 48 h 后 IGFBP-1 分泌量（ELISA ≥2 ng/mL）、免疫抑制实验（与 CD4+ T 细胞共培养，T 细胞增殖抑制率 ≥40%）。任何一项不达标，即判定为功能漂移。

培养体系：别让 FBS 成为变量之源

该细胞株对胎牛血清批次敏感度高。建议一次性采购 10 瓶同批号 FBS，-20 °C 避光保存。培养基配方：DMEM/F12（1:1）+ 10 % FBS + 1 % ITS + 10 ng/mL EGF + 1 μg/mL hydrocortisone + 1 % penicillin-streptomycin。ITS 与 EGF 不可省略，缺失后细胞形态会由梭形变为扁平，增殖速率下降 50 %。每季度做一次 FBS 批次比对实验：相同代数细胞在不同批次 FBS 中培养 72 h，CCK-8 检测 OD450 差异＞0.2 即需更换批号。

价格陷阱：便宜货背后的隐藏成本

市场报价差异极大：国产株 2000–4000 元/株，进口株 8000–12000 元/株。低价往往意味着：未做单克隆化、代数未知、无 STR、支原体阳性。看似节省 6000 元，后续因数据异常重复实验，试剂及人力成本远超差价。谈判时可要求赠送 2 支早期冻存管（代数 ≤P5）作为备份，避免后期重新购买带来的批次差异。

运输与验收：干冰不足是退货硬理由

细胞株应使用 5 kg 干冰运输，48 h 内到货。签收时立即拍照：干冰剩余量需 ≥70 %，冻存管无化冻迹象。现场做复苏抽检：取 1 支冻存管 37 °C 水浴 90 s，台盼蓝计数存活率 ≥90 %。存活率低于 85 % 直接拒收。随货文件需加盖冷链运输章，缺失可视为运输不合规。

备份策略：三代梯度冻存法

早期建立三级备份：P5、P15、P25 各冻存 10 支，液氮气相保存。每半年抽检一支 P15 备份，复苏后测倍增时间（PDT ≤24 h 为合格）。发现 PDT 延长至 30 h 以上，立即启用下一级备份，避免整批实验数据作废。