技术参数：永生化人脑膜瘤细胞 -SV40+hTERT 的完整性能档案

细胞来源与背景

源自 42 岁女性 WHO Ⅰ级脑膜瘤手术标本，术后 4 h 内完成原代培养。病理确认 PR 阳性、Ki-67 指数 3%，无 NF2 突变。经两轮有限稀释法获得单克隆，命名为 iMen-001，STR 指纹与 ATCC 数据库比对无交叉污染。

永生化元件整合方式

双元件采用 PiggyBac 转座系统一次性共转染：

• SV40 LT：cDNA 全长 2.4 kb，插入位点 chr7:128,456,789，深度测序拷贝数 1.8

• hTERT：cDNA 3.5 kb，插入位点 chr5:1,253,467，拷贝数 2.0

Southern blot 显示无随机整合片段，PCR 检测无游离型质粒残留。

生长动力学参数

表型保留数据

• 免疫荧光：EMA、Vimentin、PR 阳性率 > 95%；GFAP、S100 阴性

• 电镜：可见典型桥粒连接与复杂指状突起

• 染色体：46,XX，未见克隆性异常；第 22 号染色体单体比例 < 3 %

功能验证

• 激素受体：孕激素受体 Western blot 条带 116 kDa 清晰；雌激素受体阴性

• 药物反应：米非司酮 IC₅₀ 4.2 μM；羟基脲 IC₅₀ 0.8 mM

• 迁移：划痕实验 24 h 愈合率 38 %，Transwell 8 h 侵袭细胞数 215 ± 18

支原体与无菌检测

每批次放行标准：

• qPCR 支原体检测 Ct > 35

• 14 d 培养基无细菌、真菌浑浊

• 内毒素 < 0.1 EU/mL

冻存与复苏条件

• 冻存液：90 % FBS + 10 % DMSO

• 降温程序：–1 °C/min 至 –80 °C，液氮长期保存

• 复苏存活率：台盼蓝法 91 ± 3 %

• 复苏后 24 h 贴壁率：95 %

推荐培养体系

• 基础培养基：DMEM/F12 (1:1)

• 添加剂：10 % FBS、1 % NEAA、2 mM L-Glu、1 mM 丙酮酸钠

• 培养环境：37 °C、5 % CO₂、湿度 95 %

• 传代比例：1:3–1:4，使用 0.05 % Trypsin-EDTA 2–3 min

质量控制批次报告样本

批次 iMen-001-20250618：

• 生长曲线 R² > 0.99

• 支原体阴性

• STR 与 iMen-001 原代比对 100 % 匹配

• 软琼脂克隆 0 个 > 50 μm