5(6)-CFDA, SE：活细胞荧光标记与示踪的可靠工具

在细胞生物学研究中，对活细胞进行荧光标记和示踪是观察细胞行为、分析细胞增殖和研究细胞功能的重要手段。5(6)-CFDA, SE作为一种高效的细胞示踪染料，凭借其性能和广泛的应用，成为细胞标记领域的理想选择。

一、5(6)-CFDA, SE 的荧光标记原理与特性

5(6)-CFDA, SE 是一种用于活细胞荧光标记的细胞示踪染料。其核心成分 CFDA（羧基荧光素二乙酸酯）在细胞内被酯酶剪切后，转化为具有强荧光的羧基荧光素（CF）。这种荧光物质能够稳定地滞留在细胞内，发出明亮的绿色荧光，荧光强度与细胞内的酯酶活性相关，可反映细胞的代谢状态和活性水平。5(6)-CFDA, SE 的荧光标记具有以下特点：

• 低细胞毒性：5(6)-CFDA, SE 对细胞的毒性极低，不会显著影响细胞的正常生理功能，适用于长期的细胞培养和实验观察。

• 良好的细胞膜通透性：该染料能够快速穿透活细胞的细胞膜进入细胞内部，在细胞内发挥作用，实现对活细胞的标记。

• 稳定的荧光信号：标记后的细胞荧光信号稳定，不易受到光漂白的影响，适合长时间的荧光观察和检测。

二、5(6)-CFDA, SE 在细胞增殖与示踪中的应用

细胞增殖研究

5(6)-CFDA, SE 广泛应用于细胞增殖研究。在细胞增殖过程中，标记后的细胞会将荧光物质均分到子代细胞中，随着细胞分裂次数的增加，荧光强度逐渐减弱。通过荧光显微镜或流式细胞仪检测细胞的荧光强度，可以定量分析细胞的增殖情况。具体操作如下：

1. 将细胞与 5(6)-CFDA, SE 染色液混合孵育，使染料进入细胞并转化为荧光物质。

2. 孵育完成后，用PBS轻轻洗涤细胞，去除未进入细胞的染料。

3. 将标记后的细胞接种到培养皿或培养板中，进行细胞增殖实验。

4. 在不同时间点使用荧光显微镜或流式细胞仪检测细胞的荧光强度，分析细胞增殖情况。

细胞示踪研究

5(6)-CFDA, SE 在细胞示踪领域也有重要应用。在体内实验中，标记后的细胞可以通过荧光信号被追踪，研究人员能够实时观察细胞在生物体内的分布、迁移和存活情况。例如，在干细胞研究中，5(6)-CFDA, SE 标记的干细胞被移植到宿主体内后，可以通过荧光成像技术观察干细胞的归巢、分化和再生能力，为干细胞治疗的研究提供重要数据支持。标记后的细胞荧光信号在体内具有较好的稳定性和可检测性，能够满足长时间、多时间点的示踪需求。

三、5(6)-CFDA, SE 的操作使用方法

染色前准备

在进行 5(6)-CFDA, SE 染色之前，需要准备好细胞样本。对于贴壁细胞，可以使用胰蛋白酶消化收集细胞，然后用适当的缓冲液洗涤细胞，去除残留的培养基成分。对于悬浮细胞，直接收集细胞并进行洗涤。将细胞调整到合适的浓度，一般为 1×10^5 - 1×10^6 cells/mL，以便于后续的染色和检测。

染色过程

将准备好的细胞与 5(6)-CFDA, SE 染色液混合，染料的常用工作浓度为 1 - 10 μM。将混合后的细胞悬液置于 37℃、5% CO₂ 的细胞培养箱中孵育 15 - 30 分钟。在孵育过程中，5(6)-CFDA, SE 会穿透细胞膜进入细胞内部，被细胞内的酯酶剪切转化为荧光物质。

染色后处理

孵育完成后，用PBS轻轻洗涤细胞两次，去除未进入细胞的染料。对于需要进行细胞增殖实验的样本，将标记后的细胞接种到培养皿或培养板中，加入适量的培养基，放入细胞培养箱中进行培养。对于需要进行细胞示踪实验的样本，将标记后的细胞用于后续的体内或体外实验。使用荧光显微镜或流式细胞仪进行检测时，设置 488 nm 的激发波长和 515 - 530 nm 的发射波长检测通道，收集绿色荧光信号，实现对细胞的标记和示踪。

四、5(6)-CFDA, SE 的应用案例与研究成果

5(6)-CFDA, SE 已被广泛应用于多种研究领域。在细胞增殖研究中，科研人员利用 5(6)-CFDA, SE 标记细胞，结合荧光显微镜和流式细胞仪分析，揭示了多种细胞类型在不同生理和病理条件下的增殖特征。在细胞迁移研究中，5(6)-CFDA, SE 标记的细胞被用于观察细胞在 wound healing 实验和 transwell 实验中的迁移能力，为研究细胞运动机制和肿瘤转移提供了重要数据支持。

在干细胞研究中，5(6)-CFDA, SE 用于标记和追踪干细胞在体内的分布和分化情况。通过活体成像技术，研究人员能够实时观察干细胞的归巢、分化和再生能力，为干细胞治疗的临床应用提供了重要的实验依据。此外，5(6)-CFDA, SE 还被用于细胞功能研究，如免疫细胞的活化和功能分析、细胞间相互作用研究等，为细胞生物学的基础研究和应用开发提供了有力工具。