脂质过氧化物（LPO）检测：操作使用要点

样本收集与保存条件

LPO在生物样本中极不稳定。全血样本必须使用肝素或EDTA抗凝，避免使用枸橼酸钠（会螯合铁离子干扰测定）。采血后2小时内分离血浆，3000g离心10分钟。血浆中LPO在4℃可稳定4小时，-80℃可稳定2个月。反复冻融一次LPO损失约15%。组织样本离体后立即投入液氮，匀浆时加入0.5mM BHT和5μM EDTA，全程避光操作。

碘量法操作步骤

基于LPO中的过氧键氧化I⁻为I₂，I₂与淀粉显蓝色（570nm）。反应体系：100μL样本加入900μL冰乙酸-氯仿（3:1），混匀后加入50μL饱和KI溶液，暗处反应5分钟。加入1mL 1%淀粉溶液显色，立即测570nm。空白对照用缓冲液代替样本。同时设置一个不加KI的样本管扣除背景。该方法线性范围0.5-20μmol/L，检测下限0.3μmol/L。注意：KI溶液需新鲜配制，变黄后弃用。

显色法操作细节

市售试剂盒多采用FOX法（Ferrous Oxidation-Xylenol Orange）。原理：LPO在酸性条件下将Fe²⁺氧化为Fe³⁺，Fe³⁺与二甲酚橙形成紫色络合物（560nm）。操作顺序：样本加入FOX试剂（含250μM Fe²⁺、25mM H₂SO₄、100μM二甲酚橙、4mM BHT），25℃反应30分钟。注意加样后立即混匀，Fe²⁺在空气中缓慢氧化，工作液应在30分钟内用完。样本蛋白浓度高于2mg/mL时会沉淀，需先用甲醇-氯仿提取脂质后再测定。

微板法高通量操作

96孔板每孔加入50μL样本、200μL FOX试剂，振荡10秒后室温孵育30分钟。使用酶标仪读取560nm。每板设置标准曲线（-过-氧-化-氢-异丙苯 0-20μM）和三个质控孔（已知LPO浓度的混合血清）。板间差异通过质控孔校正。注意：不同品牌的微孔板本底吸收不同，建议使用同一批号的板子。加样时避免气泡，气泡会导致光散射使读数偏高。

结果计算与常见错误

LPO浓度（μM）= (A样本 - A空白) / (A标准 - A空白) × 标准品浓度。常见错误：未扣除样本自身的颜色干扰（如溶血样本的红色背景），此时需设置样本空白（不加FOX试剂中的Fe²⁺）。另一个错误是使用玻璃比色皿，碘量法中I₂会吸附在玻璃表面造成残留污染，应使用一次性塑料比色皿或96孔板。检测血清样本时，脂血样本（甘油三酯>3mM）需先离心去除乳糜颗粒，否则浊度干扰严重。