Goat Rabbit IgG 二抗选型：把 A23920 用到位

实验室里真正拖慢进度的从来不是仪器，而是“抗体配不上体系"。山羊抗兔 IgG 这条线 SKU 上千，参数表长得相似，真到 WB、IHC、FC 多重染色时才发现信号弱、背景高、批次跳变。下文只聊“怎么选"，把 A23920 当作参照，拆开看指标，套进真实场景，直接给答案。

1. 先锁定“抗什么"——IgG 亚类与轻链

兔 IgG 只有一条主亚类 IgG，但轻链有 κ、λ 之分。山羊抗兔 IgG 通常用全分子免疫，能同时抓 κ、λ；倘若实验里兔单克隆带 λ 轻链，而二抗只标“anti-Fc"，轻链位点亲和力下降 30%，信号直接腰斩。

A23920 的免疫原是完整兔 IgG，抗原表位覆盖 Fc 与 Fab，轻链覆盖率 96%，WB 1:10000 仍能压到 0.1 ng 条带，属于“全分子"型，通用性最高。

2. 再锁定“怎么标记"——HRP、荧光、生物素路线

• WB/ELISA 优先 HRP：A23920 自带 HRP，比活性 150 U/mg，4 ℃ 存放 12 个月活力衰减 <5%。

• 多色荧光选 Alexa Fluor 488/594/647：同一山羊宿主，预吸附鼠、人 IgG，交叉 <0.5%，可放同一 panel。

• IHC 放大体系选生物素：链霉亲和素级联能把信号再抬 8–10 倍，适合福尔马林固定组织。

标记方式一旦定错，后面换抗体要重跑整条标准曲线，时间成本最高。

3. 交叉反应预吸附——“0.5%"是分水岭

山羊血清天然含抗鼠、抗人 IgG。未经吸附的“山羊抗兔"在鼠组织切片里能蹭出棕色背景，IHC 评分直接掉级。

A23920 通过固定化鼠、人、牛 IgG 连续过柱，ELISA 检测交叉 <0.5%，达到“multi-adsorbed"级别。选购时看 COA 里“cross-reactivity"栏，数值高于 1% 的批次直接放弃，不要赌“也许我组织里没鼠"。

4. 工作浓度不是“推荐 1:1000"那么简单

抗体浓度 mg/mL、比活性、目标丰度三条线共同决定稀释度。

• WB：靶蛋白 10 ng–1 μg，A23920 1:5000–1:15000；转膜用 0.22 μm PVDF，封闭 5% 脱脂奶粉，可压背景到胶片 0.05 AU。

• IHC：FFPE 组织，抗原修复 95 ℃ 柠檬酸钠 pH6.0，A23920 1:200–1:400，DAB 显色 45 s，镜下棕度 80% 细胞质阳性。

• FC：细胞数 1×10^6，A23920 1:100，4 ℃ 30 min，荧光强度 MFI 比空白高 100 倍即可。

浓度梯度跑 3 个数量级，选信噪比最高的点，不要迷信说明书。

5. 批次差控制——把“-lot"号写进记录表

HRP 偶联是酶学反应，批间差异天然存在。同一项目连续跑 6 个月，换批号必须重标曲线。

A23920 每批次出厂留 0.5 mL 参考品，公司输入 lot 号可下载该批的 WB 图、IHC 图。实验记录里把“抗体批号"与“显色灰度值"并列，日后投稿审稿人要求原始数据，能直接导出。

6. 存储与反复取用——冻融是隐形杀手

HRP 对冻融敏感，第 3 次循环活力掉 15%。

• 收到抗体先分装 20 μL/管，-20 ℃ 保存，避免“整瓶天天拿"。

• 稀释后工作液当天弃，HRP 在含 0.05% Tween-20 的 PBS 里 4 ℃ 放 24 h 活力衰减 8%，隔夜跑膜可能背景升高。

• 若实验间隔 >1 个月，用真空冻干机把剩余抗体冻成干粉，复溶后活性回收 95% 以上。

7. 价格与货期——把“单价"拆到“每 10 cm²"

A23920 100 μL 标价 680 元，按 WB 1:10000 可配 1 L 工作液，跑 200 张迷你胶，单张成本 3.4 元；换成预装 1 mg 冻干粉规格 2180 元，复溶后相当于 10 mL 原液，可稀释 20 L，单张成本降到 0.1 元。大批量筛查直接买冻干粉，小课题组用液体规格减少分装误差。

8. 实战对照表——5 个场景一次给清