VEGF R1/Flt-1 选购指南：把血管生成研究经费用在刀刃上

1. 先分清科研级与GMP级

• 科研级：95 %纯度足够做Western、IP，单价≈1500元/100 μg，不带TSE/BSE证书，论文无压力。

• GMP级：同一产线受FDA审计，文件包≥12份，可用于细胞治疗载体开发，溢价3倍，预算先确认。

2. 选重组蛋白还是抗体对

• 重组胞外区（aa 1-758）：做配体-受体阻断、SPR，选HEK293表达，糖基化完整，KD误差<10 %。

• 捕获抗体：克隆29508，识别Ig-like D2区，不与sFlt-1短型交叉，ELISA背景直降50 %。

• 检测抗体：克隆49512，结合D3-D4，配对信号放大约1.8倍，梯度线性从7.8-500 pg/mL。

3. 标签策略决定下游应用

• His-tag：镍柱一步纯化，成本低；做晶体需切除，酶成本≈200元/次，预算要预留。

• Fc-tag：二聚体更接近天然构象，适合细胞实验；但做SPR需额外买Anti-human Fc芯片，运行成本+30 %。

• Strep-tag II：纯度高，背景金属离子零残留，适用于后续小鼠体内注射，减少炎症假阳性。

4. 糖基化模式匹配受体活性

• HEK293：复杂型N-糖，配体结合域正确折叠，VEGF-A165结合常数KD 16 pM，文献引用最多。

• Sf9昆虫：高甘露糖型，KD略升至45 pM，够用且价格便宜25 %，适合结构生物学。

• E.coli：无糖基，KD>1 nM，仅推荐做抗原或免疫，不做功能研究。

5. 批次间差异硬指标

• 活性CV：声明EC50批间≤8 %，要求随货COA附SPR传感图，缺一份直接换供应商。

• 内毒素：体内实验必须≤0.1 EU/μg，科研级常见1 EU/μg，价格差一倍，别为省钱把老鼠打休克。

6. 包装与分装陷阱

• 大包装1 mg：单价降40 %，但复溶后-80 ℃保存仅稳定6个月，小实验室优先选5×200 μg。

• 预分装微管：每管50 μL×10，惰性气体填充，减少氧化聚合，信号背景比提升20 %。

7. 检测平台兼容性

• MSD：电化学发光需高亲和力抗体，29508/49512配对S/N>100，线性范围1-1000 pg/mL。

• Luminex：微球偶联抗体重量需≤25 μg/1×10⁶球，过量导致球聚集，CV飙至15 %。

• AlphaLISA：受体-Fc做供体珠配体，需加25 mM MgCl₂防止聚集，信号半衰期60 min内读完。

8. 参考标准品溯源

• NIBSC 02/156：Flt-1/Fc标准，1000 units/ampoule，标定自家ELISA曲线，申报IND需要。

• 内部校准：与NIBSC比对偏差≤±10 %，保留双对数回归图，审计时现场调出。

9. 售后与技术支持

• 活性争议：7天内免费重测，提供原始SPR传感图；若偏差>15 %整批退款。

• 技术电话：24h内回复，VEGF-A竞争结合实验出现高背景，工程师在线帮你把封闭液换成Casein 1 %。

10. 价格横向对比速查