AGT 蛋白冻干标准品选购指南：别让“一瓶粉”毁了实验

1. 先看身份：SerpinA8 到底指哪条序列

• Uniprot 登录号：P01019，全长 485 aa，信号肽 1-33 已切除，成熟链 34-485

• 糖基化位点：Asn 271 其一N-位，占分子量 8-10 kDa，冻干后若无糖基化保护条带会虚高 5 kDa

• 等电点：pI 5.7，阴离子交换纯化用 Q Sepharose 在 pH 8.0 直接穿透，可一步去掉 60 % 宿主蛋白

2. 表达系统决定下游实验成败

活性转化率*：与肾素孵育 37 °C 30 min 产生 AngI 的摩尔产率

无血清培养基+瞬时转染的 HEK293 版本，批间差 CV<6%，做细胞分泌实验选择

3. 冻干工艺细节写在 COA 哪一行

• 保护剂配方：0.5 % HSA + 5 % 海藻糖，复溶后 2-8 °C 可稳 72 h；若只写“sucrose"复溶 4 h 后活性掉 20 %

• 水分残留：≤ 3 %，高于 5 % 储存 6 个月出现聚集峰（SEC-MALS 可见二聚体 15 %）

• 内毒素：<0.1 EU/mg，做原代肝细胞实验可直接加样，无需额外过柱除热原

4. 包装规格与分装策略

• 常见规格：100 μg、500 μg、1 mg

• 推荐分装：50 μL/管，浓度 1 mg/mL，避免反复冻融；铝箔袋抽真空，−80 °C 存 24 个月活性无漂移

• 溶剂选择：PBS + 0.05 % Tween-20，降低表面吸附，回收率提升 8 %

5. 质量文件检查清单

1. COA：完整 SDS-PAGE 还原/非还原图，条带单一

2. 质谱分子量：实测与理论差 <0.05 %，确保无截短

3. 生物活性：肾素切 AngI 的 HPLC 峰面积，EC50 报告 1.2-1.8 nM

4. 微生物：无菌、支原体阴性，细胞房使用无后顾之忧

6. 价格陷阱：同规格差 3 倍为哪般

• “科研级"：无 COA，蛋白含量用 Bradford 估算，误差 ±30 %，单价 ¥800/100 μg

• “GMP-like"：完整放行文件，可用于 IND 申报，单价 ¥2600/100 μg

• “cGMP"：FDA 备案，批记录可审计，单价 ¥4500/100 μg，商业化生产才需要

发文章选 GMP-like 足够， auditors 只查文件链，不查厂房等级

7. 运输与到货验收

• 干冰余量：箱内干冰 ≥ 2 kg，夏季运输 48 h 内温差 <10 °C

• 外观检查：冻干粉白色饼状，无塌陷、无潮解，若有黄色说明海藻糖焦化，活性下降 15 % 以上直接退货

• 复溶测试：随机抽一管加 1 mL PBS，2 min 内澄清，无颗粒，SEC-MALS 多聚体 <5 %

8. 售后支持与批次锁定

• 免费替换：活性低于标示 80 %，厂家承担往返运费

• 批次预留：一次性锁定 3 批，每批 1 mg，保证大论文前后数据一致性

• 技术支持：包含肾素-AGT 酶切反应缓冲液配方（pH 7.4, 150 mM NaCl, 0.1 % BSA），省两周条件优化

9. 下单模板直接复制

产品：Human SerpinA8/AGT, HEK293规格：1 mg，冻干COA：要求 SDS-PAGE、LC-MS、肾素活性、内毒素货期：≤ 10 工作日售后：活性不足包退换，批次可预留