CXCL2 检测没有标准品？自建校准曲线的行业标准做法

细胞培养上清里的 CXCL2 半衰期只有 90 min，厂家原装标准品 6 周后浓度偷偷掉 20 %。用失控的尺子量样本，数据发到审稿人手里直接被退回。把行业标准拆成六步，每一步都给出可验证的数字，实验室才能随时掏出被药监局认可的溯源链。

1. 主校准品：WHO NIBSC 代码 92-518 的用法

• 92-518 每支 10 000 IU，换算系数 1 IU = 0.047 ng CXCL2

• 复溶后先分装 50 μL 冻存管，−80 °C 一次冻存，禁止二次化冻

• 每管只测一次，剩余丢弃，避免蛋白吸附损失 3 %

• 记录开瓶日期、分装次数，审计时这就是原始溯源记录

2. 工作曲线稀释液：0.5 % BSA 为何优于 PBS 裸液

• PBS 裸液里 CXCL2 24 h 后回收率掉到 85 %，非特异吸附明显

• 0.5 % BSA + 0.05 % Tween-20 能把回收率拉回 98 %

• 稀释液现配现用，4 °C 存放超过 72 h 直接报废，写进 SOP 不被挑战

3. 六点曲线浓度：覆盖 7–2000 pg/mL 的区间设计

• 最高 2000 pg/mL 对应严重炎症小鼠血清峰值，较低 7 pg/mL 接近健康人基线

• 采用 1:3 系列稀释，减少移液步骤，误差比 1:2 稀释降低 30 %

• 每个浓度双孔上样，孔间差 >5 % 整板重测，数据不被质疑

4. 拟合方程：四参数 Logistic 的权重设置

• 权重 1/Y² 能把低浓度点偏差压到 3 % 以内，不加权重低段偏差 12 %

• 软件输出 R² ≥ 0.998，AIC 值 < −8，才算合格曲线

• 拟合失败时先查最高浓度 OD 是否 >3.0，超出酶标仪线性区直接稀释重来

5. 批间溯源：QC 样本的允许偏差窗

• 用 400 pg/mL 自建 QC，每批随样检测，靶值 ±10 % 为绿灯区

• 连续 3 批 QC 落在 12 % 外，启动 CAPA：重新标定主校准品

• 把 QC 趋势图打印签字，药监局飞检时首份被抽，缺失就开缺陷条

6. 报告格式：量值单位与不确定度

• 结果报告写 “CXCL2：523 pg/mL，U=±46 pg/mL（k=2）"

• 不确定度来自 3 个分量：校准品 3 %、稀释 2 %、测量 4 %，合成后 8.8 %

• 审稿人看到不确定度才会放行，缺项直接退回补实验