肝细胞生长因子 ELISA 试剂盒选购指南：别让“便宜”毁了你的数据

1. 先锁定检测对象：人源、鼠源还是跨物种？

肝细胞生长因子（HGF）在人和小鼠之间的同源性约 90 %，但单抗表位差异足以让抗体对“对方"蛋白的亲和力下降 10–50 倍。

• 人肝细胞生长因子 ELISA 试剂盒必须标注“Human HGF ELISA Kit"，并给出与鼠、大鼠、猪的血清交叉反应率，最好 <0.5 %。

• 如果实验室同时做人源和鼠源样本，买两套独立体系，比事后用“交叉反应系数"修正数据更省钱。

2. 抗体对决定灵敏度，不是“ng/mL"字样

真正影响下限的是抗体对的亲和常数（Kd ≤50 pM）和识别表位距离。

• 查看说明书是否给出“抗体对信息"：例如捕获抗体 clone 24612，检测抗体 biotinylated clone 24627，这类细节意味着厂家做过表位竞争实验。

• 如果灵敏度栏只写“<15 pg/mL"却拿不出 Kd 或 S/B≥2.0 的原始图，多半是 2 h 快速孵育的“营销灵敏度"，真上样血清就掉到 100 pg/mL 以上。

3. 标准品溯源：NIBSC 代码 96/556 还是自制 calibrator？

HGF 糖基化水平影响免疫活性，只有 WHO 国际标准品 96/556 能溯源到 IU。

• 优质试剂盒会把每批标准品浓度换算成 IU/mL，并附带“相对于 96/556 的相对活性 0.95–1.05"的 COA。

• 如果说明书只写“recombinant HGF"而不给溯源号，批次间差异可达 ±30 %，纵向实验无法比较。

4. 样本体积与稀释线性：血清 10 µL 还是 100 µL？

高敏试剂盒常把样本量压到 10 µL，看似省样，其实稀释倍数低，基质效应放大。

• 要求厂家提供“5–100 µL 血清量-回收率曲线"，回收率 80–120 % 区间越宽，越适合小鼠尾血等微量样本。

• 做细胞上清时，注意稀释液里是否含 5 % 小鼠血清阻断剂；否则 HGF 会吸附到塑料孔壁，出现“稀释越高、测值反升"的假线性。

5. 板内精密度≠板间精密度，看清 CV 计算方式

说明书常把“板内 CV<5 %"放在首页，却把“板间 CV<10 %"缩到附录。

• 让供应商提供三批次独立 Kit 的 20 板 raw data，计算 3×20=60 板的 inter-assay CV；肝病队列长期随访项目，板间 CV 每增加 1 %，临床分期误判率上升 2.3 %。

6. 运输温控：干冰还是冰袋？

HGF 抗体对温度震荡敏感，反复冻融一次活性下降 8–12 %。

• 选购时问清“运输是否全程 -20 °C 干冰"，并要求箱内温度记录仪数据；冰袋运输即使 48 h 保持 0–4 °C，标准品也会出现 5 % 漂移。

7. 售后支持：能否提供“数据诊断"？

真正靠谱的厂家会附带 Excel 模板，自动计算回收率、平行性、Hook effect 检查。

• 发一封邮件附上 96 孔原始 OD，24 h 内收到修正后的四参数拟合曲线和可疑样本标记，这种服务比便宜 200 元更有价值。

8. 价格陷阱：带不带“预稀释标准品"？

部分国产 Kit 把标准品预稀释成 7 瓶，看似方便，实则开封后 24 h 失效。

• 选择“冻干标准品 + 自备缓冲液"方案，自己分装成 50 µL/管，-80 °C 可存 6 个月，平均到每块板成本下降 35 %。

9. 证书与文献：IF>10 的 paper 才是硬广告

让销售提供近三年内使用同款 Kit 发表的 SCI 原文，IF>10 的至少 3 篇；文中材料部分必须写明货号与批次。

• 检索 PubMed 时输入“Human HGF ELISA Kit + 货号"，若返回 0 篇，直接 pass。

10. 下单前的“三问"邮件模板

1. 请附本批次与 WHO 96/556 的活性对比 COA。

2. 请附 3 批次板间 CV 原始数据。

3. 请附 10 µL 与 100 µL 样本量的回收率对比图。

三封邮件 24 h 内得到清晰附件，再谈价格；否则换一家。