永生猪巨噬细胞(含成纤维细胞)-SV40：选购指南与实战避坑

品系溯源：SV40大T抗原的“永生开关"

SV40大T抗原通过抑制p53与Rb通路，阻断细胞周期检查点，诱导端粒酶持续表达，让原代猪巨噬细胞与成纤维细胞跨越Hayflick极限。市面主流品系分两类：

• PigMac-SV40-1：巨噬细胞纯度>92%，IL-6分泌量稳定在1.2–1.8 ng/mL，适合炎症模型。

• PigFibro-SV40-2：成纤维细胞纯度>95%，胶原I分泌量≥15 μg/10⁶ cells，常用于组织工程支架验证。

选购时索取STR鉴定报告，比对ATCC猪源库DSMZ-Accession号，避免鼠源或人源交叉污染。

培养基配方：血清批次差异的隐形杀手

DMEM高糖+10% FBS是通用基底，关键在血清。南美胎牛血清铁饱和度<15%时，巨噬细胞极化标记CD163表达量下降40%。建议：

• 预留同一批号血清做6个月实验；

• 每50 mL培养基添加5 ng/mL猪GM-CSF，维持M1表型；

• 成纤维细胞需额外2 mM L-谷氨酰胺，防止SV40压力下凋亡。

支原体筛查：荧光染色法VS PCR法

SV40永生化细胞更易隐匿支原体。荧光染色法（Hoechst 33258）灵敏度10³ copies/mL，适合日常监测；PCR法可检出10 copies/mL，用于批次放行。新购细胞需双法交叉验证，阳性率>1%直接退货。

冻存密度：复苏存活率的黄金区间

巨噬细胞冻存密度1×10⁷ cells/mL时，复苏存活率82%；密度降至5×10⁶ cells/mL，存活率跌破60%。成纤维细胞耐受性更高，3×10⁶–1.5×10⁷ cells/mL均能保持>85%存活。冻存液配方：90% FBS + 10% DMSO，程序降温盒-80℃过夜后转液氮。

污染应对：真菌爆发时的72小时急救

真菌污染初期镜下可见细丝，48小时长满视野。立即执行：

1. 丢弃培养上清，PBS洗3次；

2. 0.1%两性霉素B处理2小时；

3. 换新瓶传代，培养基添加5 μg/mL两性霉素B维持3代。

SV40永生化细胞对两性霉素B耐受性强，存活率仍>70%。

认证文件：GLP实验室的准入门槛

采购合同需附三份文件：

• STR图谱：每季度更新一次；

• 无菌检测报告：涵盖细菌、真菌、支原体、猪蓝耳病毒；

• 细胞代次声明：保证P15以内发货，避免SV40插入位点漂移导致表型变异。