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在哺乳动物细胞培养中,选择合适的培养基对于细胞的生长和功能维持至关重要。DMEM 高糖培养基(含 10% 血清,1% 双抗)以其全面的营养成分和即用型配方,成为众多细胞培养场景的理想选择。
DMEM 高糖培养基经过精心配制,已包含 10% 胎牛血清和 1% 双抗(青霉素 - 链霉素溶液),无需额外添加成分,开瓶即可直接用于细胞培养。这种即用型设计大大简化了实验前的准备工作,减少了因配制培养基带来的误差和污染风险,特别适合那些对时间敏感的实验和需要快速启动培养的场景。
DMEM 培养基本身含有丰富的营养成分,包括各种氨基酸、维生素、矿物质和葡萄糖。与 MEM 相比,DMEM 增加了多种成分的用量,尤其是葡萄糖含量高于 4,500mg/L,为细胞提供了充足的能源供应。10% 胎牛血清的添加进一步丰富了培养基中的生长因子和细胞黏附因子,支持细胞的快速增殖和健康生长。1% 双抗成分则有效抑制细菌和真菌的生长,降低培养过程中的污染风险。
DMEM 高糖培养基适用于多种哺乳动物细胞的培养,包括但不限于成纤维细胞、神经元细胞、神经胶质细胞、平滑肌细胞等原代细胞,以及常见的细胞系如 HeLa、293、Cos-7 和 PC-12 等。对于生长速度快、粘附性低的细胞系,如杂交瘤的骨髓瘤细胞、克隆细胞、DNA 转染的转化细胞等,该培养基能够提供理想的生长环境,促进细胞的旺盛生长和稳定传代。
在生物制药领域,DMEM 高糖培养基被广泛用于疫苗生产和重组蛋白表达。例如,利用 CHO 细胞生产重组人促红细胞生成素(EPO)和乙肝疫苗等。其高糖配方为细胞的高密度培养和生产过程提供了充足的能源,有助于提高产物的产量和质量。在基础研究中,该培养基为细胞的长期培养、基因转染、药物筛选等实验提供了稳定的培养平台。
DMEM 高糖培养基应保存在 4℃左右的低温环境中,避免光照直射和温度波动过大。在使用前,将培养基从冰箱中取出,使其恢复至室温,以确保细胞在接种时不会因温度骤变而受到应激。
细胞接种:根据细胞类型和实验需求,将细胞以适当的密度接种到培养容器中。对于贴壁细胞,可以使用培养瓶、培养皿或培养板;对于悬浮细胞,通常使用摇瓶或悬浮培养袋。
培养条件:将接种后的细胞放入细胞培养箱中,设置温度为 37℃,湿度保持在 95% 以上,二氧化碳浓度为 5% 左右。这些条件有助于维持培养基的 pH 值稳定,为细胞提供一个适宜的生长环境。
定期换液:根据细胞的生长速度和代谢需求,定期更换培养基,一般每 2 - 3 天更换一次。换液时,吸出旧的培养基,用适量的 PBS 或无菌生理盐水轻轻冲洗细胞,再加入新鲜的 DMEM 高糖培养基。
观察与记录:在细胞培养过程中,定期使用倒置显微镜观察细胞的形态和生长状态,记录细胞的生长曲线和分裂情况。注意观察细胞的贴壁情况、细胞密度和细胞形态是否正常。
当细胞生长达到实验要求的密度或状态时,可以进行下一步实验操作。对于需要长期保存的细胞,可以将细胞冻存于液氮中。冻存时,使用含 10% DMSO 的冻存培养基,将细胞悬浮液分装到冻存管中,放入程序降温盒中逐步降温,最终保存于液氮罐中。